THE POWER OF THE SMALL: THE EXAMPLE OF Paracoccidioides brasiliensis CONIDIA / O poder do pequeno: o exemplo dos conídios do Paracoccidioides brasiliensis

SUMMARYResearch on Paracoccidioides brasiliensis has centered in the yeast cell probably because of the lack of distinctive features in the mycelium. In 1942 and for the first time, lateral conidia were noticed in the fungus' hyphae. Later on, Brazilian, Venezuelan and Argentinean researchers described "aleurias" when the fungus was grown in natural substrates. In 1970 authors became interested in the conidia and were able to obtain them in large numbers and treat them as individual units. Their shape and size were defined and the presence of all the elements of a competent eukaryotic cell were demonstrated. Conidia exhibited thermal dimorphism and, additionally, when given intranasally to BALB/c male mice, they converted into yeasts in the lungs and produce progressive pulmonary lesions with further dissemination to other organs. Studies on the phagocyte-conidia interaction were revealing and showed that these versatile structures allow a better understanding of the host- P. brasiliensisinteractions.

RESUMOA investigação sobre Paracoccidioides brasiliensis tem-se centrado na célula de levedura, provavelmente devido à falta de características distintas no micélio. Em 1942 e, pela primeira vez, conídios laterais foram notados nos hifas dos fungos. Mais tarde, pesquisadores brasileiros, venezuelanos e argentinos descreveram "aleurias" quando o fungo foi cultivado em substratos naturais. Em 1970, os autores se interessaram pelos conídios e foram capazes de obtê-los em grande número e tratá-los como unidades individuais. A sua forma e tamanho foram definidos, e a presença de todos os elementos de uma célula eucariótica competente foram demonstrados. Conídios apresentam dimorfismo térmico e, além disso, quando administrados por via intranasal a camundongos BALB/c machos, são convertidos em leveduras nos pulmões e produzem lesões pulmonares progressivas com posterior disseminação para outros órgãos. Estudos sobre a interação de fagócitos-conídios foram reveladores e mostraram que estas estruturas versáteis permitem melhor compreensão das interacções entre hospedeiro e P. brasiliensis.

Influence of the Paracoccidioides brasiliensis 14-3-3 and gp43 proteins on the induction of apoptosis in A549 epithelial cells

The fungal strain Paracoccidioides brasiliensis remains viable inside of epithelial cells and can induce apoptosis in this population. However, until now, the molecules that participate in this process remained unknown. Thus, this study evaluated the contribution of two P. brasiliensis molecules, the 14-3-3 and glycoprotein of 43 kDa proteins, which had been previously described as extracellular matrix adhesins and apoptosis inductors in human pneumocytes. Accordingly, epithelial cells were treated with these molecules for different periods of time and the expression of the apoptosis regulating-proteins Bak, Bax, Bcl-2, p53 and caspases were evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling, flow cytometry and real-time polymerase chain reaction analysis. Our results demonstrated that treatment with these molecules induces apoptosis signalling in pulmonary epithelial cells, showing the same pattern of programmed cell-death as that observed during infection with P. brasiliensis. Thus, we could conclude that P. brasiliensis uses these molecules as virulence factors that participate not only in the fungal adhesion process to host cells, but also in other important cellular mechanisms such as apoptosis.

Interaction between Paracoccidioides brasiliensis conidia and the coagulation system: involvement of fibrinogen

The infectious process starts with an initial contact between pathogen and host. We have previously demonstrated that Paracoccidioides brasiliensis conidia interact with plasma proteins including fibrinogen, which is considered the major component of the coagulation system. In this study, we evaluated the in vitro capacity of P. brasiliensis conidia to aggregate with plasma proteins and compounds involved in the coagulation system. We assessed the aggregation of P. brasiliensis conidia after incubation with human serum or plasma in the presence or absence of anticoagulants, extracellular matrix (ECM) proteins, metabolic and protein inhibitors, monosaccharides and other compounds. Additionally, prothrombin and partial thromboplastin times were determined after the interaction of P. brasiliensis conidia with human plasma. ECM proteins, monosaccharides and human plasma significantly induced P. brasiliensis conidial aggregation; however, anticoagulants and metabolic and protein inhibitors diminished the aggregation process. The extrinsic coagulation pathway was not affected by the interaction between P. brasiliensis conidia and plasma proteins, while the intrinsic pathway was markedly altered. These results indicate that P. brasiliensis conidia interact with proteins involved in the coagulation system. This interaction may play an important role in the initial inflammatory response, as well as fungal disease progression caused by P. brasiliensis dissemination.

The influence of carbohydrates in the interaction of Paracoccidioides brasiliensis with CCL-6 cells in vitro / A influência de carboidratos na interação entre Paracoccidioides brasiliensis e células CCL-6 (in vitro)

INTRODUCTION: Little is known about the early events in the interaction between Paracoccidioides brasiliensis and its host. To understand the effect of carbohydrates in the interaction between the fungus and epithelial cell in culture, we analyzed the influence of different carbohydrate solutions on the adhesion of P. brasiliensis yeast cells to CCL-6 cells in culture. METHODS: Fungal cells were cultivated with the epithelial cell line, and different concentrations of D-fucose, N-acetyl-glucosamine, D-mannose, D-glucosamine, D-galactosamine, sorbitol and fructose were added at the beginning of the experiment. Six hours after the treatment, the cells were fixed and observed by light microscopy. The number of P. brasiliensis cells that were adhered to the CCL-6 monolayer was estimated. RESULTS: The number of adhesion events was diminished following treatments with D-fucose, N-acetyl-glucosamine, D-mannose, D-glucosamine and D-galactosamine as compared to the untreated controls. Sorbitol and fructose-treated cells had the same adhesion behavior as the observed in the control. P. brasiliensis propagules were treated with fluorescent lectins. The FITC-labeled lectins WGA and Con-A bound to P. brasiliensis yeast cells, while SBA and PNA did not. CONCLUSIONS: The perceptual of adhesion between P. brasiliensis and CCL-6 cells decreased with the use of D-mannose, N-acetyl-glucosamine and D-glucosamine. The assay using FITC-labeled lectins suggests the presence of N-acetyl-glucosamine, α-mannose and α-glucose on the P. brasiliensis cell surface. An enhanced knowledge of the mediators of adhesion on P. brasiliensis could be useful in the future for the development of more efficient and less harmful methods for disease treatment and control.

INTRODUÇÃO: Pouco se conhece a respeito dos eventos iniciais que mediam as interações entre Paracoccidioides brasiliensis e seus hospedeiros. Com a intenção de compreender a importância de carboidratos junto a estas interações, foram analisados os efeitos de soluções de carboidratos sobre a adesão de células leveduriformes de P. brasiliensis sobre culturas de células CCL-6. MÉTODOS: As células fúngicas foram cultivadas com as células epiteliais e diferentes concentrações de D-fucose, N-acetyl-glucosamina, D-manose, D-glicosamina, D-galactosamina, sorbitol e frutose foram adicionadas ao cultivo no início da interação. Após 6h de tratamento, as células foram fixadas e observadas em microscópio óptico. RESULTADOS: Os tratamentos utilizando D-fucose, N-acetil-glicosamina, D-manose, D-glicosamina e D-galactosamina reduziram os números de adesões quando comparados com o controle. Os tratamentos realizados com o uso de sorbitol e frutose apresentaram os mesmos resultados observados no controle. Para detectar a presença de carboidratos na superfície do fungo, propágulos de P. brasiliensis foram tratados com lectinas fluorescentes. WGA-FITC e Con-A-FITC se ligaram às células de P. brasiliensis ao contrário de SBA e PNA. CONCLUSÕES: O percentual de adesão entre P. brasiliensis e células CCL-6 foi reduzido com o uso de D-manose, N-acetil-glicosamina e D-glicosamina. O uso de lectinas marcadas sugeriu a presença de N-acetil-glicosamina, α-manose e α-glicose na superfície de P. brasiliensis. Estes resultados contribuem para o aumento do conhecimento relacionado aos mediadores de adesão de P. brasiliensis, e poderão ser utilizados no futuro para o desenvolvimento de medidas mais eficientes para o controle e tratamento deste patógeno.

Kinetic analysis of gene expression during mycelium to yeast transition and yeast to mycelium germination in Paracoccidioides brasiliensis / Análisis de la cinética de expresión de genes durante la transición de micelio a levadura y la germinación levadura a micelio en Paracoccidioides brasiliensis

Introduction: Paracoccidioidomycosis is an endemic systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis, a thermally dimorphic fungus that in tissues and cultures at 37°C grows as a yeast while at lower temperatures (less than 24°C) it becomes a mold; however the genes that rule these processes and their expression are poorly understood. Objective: This research focused on the kinetic expression of certain genes in P. brasiliensis throughout the dimorphic process, one that involves the transition from the mycelium to yeast forms and the germination from the yeast to mycelium form. Materials and methods: A real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) was optimized to measure the expression of ten genes connected with diverse cellular functions including cell synthesis and wall structure, oxidative stress response, heat shock response, metabolism, proteins’ processing, solute transport across the cell membrane and signal transduction pathways at different time points during the mycelia to yeast transition, as well as in the yeast to mycelia germination processes. Results: Genes involved in cell synthesis and wall structure, metabolism and signal transduction were differentially expressed and highly up-regulated during the yeast to mycelia germination process; on the other hand, genes involved in heat shock response, cell synthesis and wall structure were highly up-regulated during the mycelia to yeast transition process. The remaining genes were differentially regulated during both processes. Conclusion: In this work the up-regulation of certain genes involved in the morphological changes occurring in P. brasiliensis yeast and mycelia forms were confirmed, indicating that these biological processes play an important role during the host-pathogen interactions, as well as in the fungus adaptation to environmental conditions.

Introducción. La paracoccidioidomicosis es una micosis sistémica causada por el hongo termodimorfo Paracoccidioides brasiliensis. En tejidos y cultivos a 37°C crece como levadura, mientras que a temperaturas menores de 24°C crece como un moho. Sin embargo, se conoce poco sobre los genes que regulan estos procesos. Objetivo. Se evaluó la cinética de expresión de algunos genes en P. brasiliensis mediante el proceso de dimorfismo incluida la transición del micelio a levadura y de la germinación de levadura a micelio. Materiales y métodos. Se optimizó una PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) para medir la expresión de diez genes relacionados con diversas funciones celulares que incluyeron: síntesis de pared, respuesta al estrés oxidativo, respuesta al choque térmico, metabolismo, procesamiento de proteínas, trasporte de solutos a través de membranas y transducción de señales, todo ello a diferentes tiempos durante la transición de micelio a levadura, así como de la germinación de levadura a micelio. Resultados. Se encontró que los genes relacionados con síntesis de pared, metabolismo y transducción de señales, se expresaban de manera diferencial y con regulación positiva durante la germinaciónlevadura a micelio, mientras que algunos genes relacionados con respuesta a choque térmico y a síntesis de pared estaban sobreexpresados en la transición de micelio a levadura. Los genes restantes se regularon de manera diferencial en ambos procesos. Conclusiones. En este trabajo se confirma la regulación positiva de algunos genes relacionados con los cambios morfológicos de las fases levadura y micelio en P. brasiliensis, procesos biológicos que juegan un papel de importancia durante la interacción huésped-parásito y durante la adaptación del hongo al ambiente, respectivamente.

Imunologia da paracoccidioidomicose / Immunology of paracoccidioidomycosis

Paracoccidioidomicose é a mais prevalente micose sistêmica na América Latina, em pacientes imunocompetentes, sendo causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioiddes brasiliensis. O estudo da sua imunopatogênese é importante na compreensão de aspectos relacionados à história natural, como a imunidade protetora, e à relação entre hospedeiro e parasita, favorecendo o entendimento clínico e a elaboração de estratégias terapêuticas. O polimorfismo clínico da doença depende, em última análise, do perfil de resposta imune que prevalece expresso pelo padrão de citocinas teciduais e circulantes, além da qualidade da resposta imune desencadeada, que levam ao dano tecidual.

Paracoccidioidomycosis is the most prevalent systemic mycosis in Latin America, among immunecompetent patients. It's caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiddes brasiliensis. Investigations regarding its immunopathogenesis are very important in the understanding of aspects related to natural history, as the protective immunity, and the relationship between host and parasite; also favoring the knowledge about clinical patterns and the elaboration of therapeutic strategies. The disease clinical polymorphism depends, at least, of the immune response profile according to the tissue and blood released citokynes, resulting in tissue damage.

Induction of apoptosis in A549 pulmonary cells by two Paracoccidioides brasiliensis samples

Paracoccidioidomycosis presents a variety of clinical manifestations and Paracoccidioides brasiliensis can reach many tissues, most importantly the lungs. The ability of the pathogen to interact with host surface structures is essential to its virulence. The interaction between P. brasiliensis and epithelial cells has been studied, with particular emphasis on the induction of apoptosis. To investigate the expression of different apoptosis-inducing pathways in human A549 cells, we infected these cells with P. brasiliensis Pb18SP (subcultured) and 18R (recently isolated from cell culture and showing a high adhesion pattern) samples in vitro. The expressions of Bcl-2, Bak and caspase 3 were analysed by flow cytometry and DNA fragmentation using the TUNEL technique. Apoptosis of human A549 cells was induced by P. brasiliensis in a sample and time-dependent manner. Using an in vitro model, our data demonstrates that caspase 3, Bak, Bcl-2 and DNA fragmentation mediate P. brasiliensis-induced apoptosis in A549 cells. The overall mechanism is a complex process, which may involve several signal transduction pathways. These findings could partially explain the efficient behaviour of this fungus in promoting tissue infection and/or blood dissemination.

In vitro and in situ activation of the complement system by the fungus Lacazia loboi

Since there are no studies evaluating the participation of the complement system (CS) in Jorge Lobo's disease and its activity on the fungus Lacazia loboi, we carried out the present investigation. Fungal cells with a viability index of 48 percent were obtained from the footpads of BALB/c mice and incubated with a pool of inactivated serum from patients with the mycosis or with sterile saline for 30 min at 37 °C. Next, the tubes were incubated for 2 h with a pool of noninactivated AB+ serum, inactivated serum, serum diluted in EGTA-MgCl2, and serum diluted in EDTA. The viability of L. loboi was evaluated and the fungal suspension was cytocentrifuged. The slides were submitted to immunofluorescence staining using human anti-C3 antibody. The results revealed that 98 percent of the fungi activated the CS by the alternative pathway and no significant difference in L. loboi viability was observed after CS activation. In parallel, frozen histological sections from 11 patients were analyzed regarding the presence of C3 and IgG by immunofluorescence staining. C3 and IgG deposits were observed in the fungal wall of 100 percent and 91 percent of the lesions evaluated, respectively. The results suggest that the CS and immunoglobulins may contribute to the defense mechanisms of the host against L. loboi.

Considerando que não existe nenhum estudo avaliando a participação do sistema complemento (SC) na doença de Jorge Lobo e sua atividade sobre o fungo Lacazia loboi, realizamos o presente trabalho. Os fungos foram obtidos dos coxins plantares de camundongos BALB/c com índice de viabilidade de 48 por cento e, em seguida, foram incubados com pool de soro inativado de pacientes ou com solução salina estéril (SSE) por 30 min, a 37 °C. Os tubos foram incubados, por 2 h, com pool de soro AB+ sem inativar, inativado, diluído em EGTA-MgCl2 e EDTA. A viabilidade do L. loboi foi avaliada e a suspensão fúngica foi citocentrifugada. As lâminas foram submetidas à técnica de imunofluorescência empregando o anticorpo anti-C3 humano. Os resultados revelaram que 98 por cento dos fungos ativaram o SC pela via alternativa e que não houve diferença significante na viabilidade do L. loboi após ativação do SC. Em paralelo, cortes histológicos congelados de 11 pacientes foram avaliados quanto à presença de C3 e IgG, pela técnica de imunofluorescência. Foram encontrados depósitos de C3 e de IgG na parede dos fungos em 100 por cento e 91 por cento das lesões avaliadas, respectivamente. Os resultados sugerem que o SC e as imunoglobulinas poderiam contribuir nos mecanismos de defesa do hospedeiro contra o L. loboi.

Avaliacao das subpopulacoes de timocitos em camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis por via intratraqueal / Evaluation of thymocyte subpopulations in BALB / c mice infected with Paracoccidioides brasiliensis intratracheally

O P. brasiliensis e o agente etiologico da paracoccidioidomicose, uma doenca granulomatosa cronica que afeta primariamente os pulmoes e esta frequentemente relacionada com a diminuicao da resposta imune celular especifica. A inoculacao intraperitonial deste fungo em camundongos causa a trofia do timo, orgao respónsavel pela geracao de linfocitos T que dirigem a reposta imune especifica. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a ocorrencia de atrofia timica em camundongos infectados com P. brasiliensis pela via intratraqueal, que constituium modelo mais fiel da doenca. A infeccao por esta via, resultou claramente em atrofia timica, que foi caracterizada por uma diminuicao do peso, celularidade e viabilidade celular, alem de alteracoes nas subpopulacoes dos timocitos, como diminuicao dos duplos dispositivos (CD4+CD8+) e consequente aumento dos duplos negativos (CD4-CD8-) e timocitos CD4+CD8- e CD4-CD8+.

Inhibitory effect of deferoxamine on Paracoccidioides brasiliensis survival in human monocytes: reversal by holotransferrin not by apotransferrin

Os mecanismos utilizados pelo Paracoccidioides brasiliensis para sobreviver em células fagocitárias ainda não estão elucidados. O metabolismo celular férrico é muito importante para o crescimento de inúmeros patógenos intracelulares cuja capacidade de se multiplicarem em fagócitos mononucleares é dependente da disponibilidade intracelular do íon ferro. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel do ferro intracelular sobre a capacidade do P. brasiliensis sobreviver em monócitos humanos. O tratamento de monócitos com deferoxamina, uma droga quelante, diminuiu a sobrevivência de leveduras do fungo de forma dose-dependente. O efeito inibidor da deferoxamina sobre a sobrevivência do P. brasiliensis foi revertido por transferrina saturada com ferro (holotransferrina) mas não por transferrina insaturada (apotransferrina). Estes resultados sugerem que a sobrevivência do P. brasiliensis em monócitos humanos é dependente do íon ferro.

Oxidative stress response in Paracoccidioides brasiliensis

Survival of pathogenic fungi inside human hosts depends on evasion from the host immune system and adaptation to the host environment. Among different insults that Paracoccidioides brasiliensis has to handle are reactive oxygen and nitrogen species produced by the human host cells, and by its own metabolism. Knowing how the parasite deals with reactive species is important to understand how it establishes infection and survives within humans. The initiative to describe the P. brasiliensis transcriptome fostered new approaches to study oxidative stress response in this organism. By examining genes related to oxidative stress response, one can evaluate the parasite's ability to face this condition and infer about possible ways to overcome this ability. We report the results of a search of the P. brasiliensis assembled expressed sequence tag database for homologous sequences involved in oxidative stress response. We described several genes coding proteins involved in antioxidant defense, for example, catalase and superoxide dismutase isoenzymes, peroxiredoxin, cytochrome c peroxidase, glutathione synthesis enzymes, thioredoxin, and the transcription factors Yap1 and Skn7. The transcriptome analysis of P. brasiliensis reveals a pathogen that has many resources to combat reactive species. Besides characterizing the antioxidant defense system in P. brasiliensis, we also compared the ways in which different fungi respond to oxidative damage, and we identified the basic features of this response.

Cell signaling pathways in Paracoccidioides brasiliensis: inferred from comparisons with other fungi

The human fungal pathogen Paracoccidioides brasiliensis is an ascomycete that displays a temperature-dependent dimorphic transition, appearing as a mycelium at 22 degrees C and as a yeast at 37 degrees C, this latter being the virulent form. We report on the in silico search made of the P. brasiliensis transcriptome-expressed sequence tag database for components of signaling pathways previously known to be involved in morphogenesis and virulence in other species of fungi, including Saccharomyces cerevisiae, Cryptococcus neoformans, Candida albicans, and Aspergillus fumigatus. Using this approach, it was possible to identify several protein cascades in P. brasiliensis, such as i) mitogen-activated protein kinase signaling for cell integrity, cell wall construction, pheromone/mating, and osmo-regulation, ii) the cAMP/PKA system, which regulates fungal development and virulence, iii) the Ras protein, which allows cross-talking between cascades, iv) calcium-calmodulin-calcineurin, which controls cell survival under oxidative stress, high temperature, and membrane/cell wall perturbation, and v) the target of rapamycin pathway, controlling cell growth and proliferation. The ways in which P. brasiliensis responds to the environment and modulates the expression of genes required for its survival and virulence can be inferred through comparison with other fungi for which this type of data is already available.

Paracoccidioides brasiliensis RNA biogenesis apparatus revealed by functional genome analysis

The RNA biogenesis machinery of Paracoccidioides brasiliensis was assessed by comparative analyses of PbAESTs (P. brasiliensis assembled expressed sequence tags (ESTs)) with sequences from Saccharomyces cerevisiae MIPS database. PbAESTs related to almost all categories of S. cerevisiae RNA biogenesis were found. Two of the 12 S. cerevisiae RNA Pol II core subunits, Rpb3 and Rpb7, were found, probably reflecting the growth phase from which the cDNA libraries used in ESTs generation were constructed, as well as the low abundance of some of these transcripts. We have also found orthologs to TATA-box-binding protein (TBP), and at least one subunit of each TBP-associated factors (TFII) in P. brasiliensis transcriptome, except TFIIB. Genes associated to the chromatin remodeling complex, as well as transcription factors probably involved in the control of genes associated to a sexual cycle and virulence, were also identified. With respect to the pre-mRNA processing, 65 PbAEST orthologs to S. cerevisiae basal splicing machinery and 21 orthologs of 5'- and 3'-end formation processes were found. Components involved in RNA interference were detected, suggesting that this gene expression regulation mechanism is probably used by P. brasiliensis. Twelve PbAESTs related to Pol I and Pol III machineries were assigned as S. cerevisiae orthologs. Finally, 25 and 10 PbAESTs associated to rRNA and tRNA processing, respectively, were detected. Taken together, our results enable us to depict, for the first time, a global view of transcription and RNA processing in P. brasiliensis.

Tomografia computadorizada de torax de alta resolucao em paracoccidioidomicose (blastomicose sul-americana) / Resolution thoracic computed tomography for the diagnosis of south american blastomycosis

A blastomicose sul americana (BSB) e doenca causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis.Ela acomete principalmente lavradores do sexo masculino, por via inalatoria,acometendo os pulmoes em mais de 80 por cento dos casos na forma cronica do adulto.Foram estudados 30 pacientes com DSA durante tes anos com radiogramas de torax e tomografia computadorizada de torax de alta resolucao(TCTAR) para correlacionar seus achados no sentido de auxiliar o diagnostico.O radiograma confirmou os achados mais comuns:infiltrados reticular e nodular,mais nos campos medios,alguns com consolidacao(19=63 por cento)hiperinsuflacao(20=66 pr cento)e bolhas subpleurais(10=33por cento).A TCTAR mostrou a historia natural da doenca: 1. Via inalatoria:com multiplas areas parenquimatosas semelhates a vidro fosco que podem progredir ou regredir(3=10 por cento) 2. Lesoes parenquimatosas progressivas com nodulos(25=83,3 por cento) consolidacoes irregulares(20=66 por cento, as vezes com insuflacao(22=73 por cento e bronquiectasias de tracao( 4=13 por cento)cavitacoes podem ocorrer por necrose(9=30 por cento) 3.Via linfatica com espessamento intersticial axial na zona medular com distorcao(25=83,3 por cento)4.Doenca progressiva com componente fibrotico e insuflacao(4=13 por cento).Conclusoes:As lesoes podem predominar em uma das duas regioes pulmonares.Temos:a padrao predominando lesoes parenquimatosas;padra predominando lesoes interticiais axiais;padrao predominando lesoes escavadas;e padrao combinado das lesoes

Variabilidade microbiólogica de isolados de Paracoccidioides brasiliensis obtidos de pacientes com diferentes formas clínicas / Study of microbiological variability of Paracoccidioides brasiliensis strains from patients with diferents clinical forms

Diversos trabalhos têm demonstrado variabilidade biológica em Paracoccidioides brasiliensís. As múltiplas manifestações clínicas da PCM e a depressão da resposta imune celular, especialmente do tipo 1, que é recuperada após terapêutica efetiva, são indicativos de que os processos de infecção e evolução da doença dependem também de fatores relacionados à virulência do agente. Com o objetivo de investigar possíveis mercadores que pudessem estar associados ao papel do agente na determinação da forma clínica da PCM foi proposto um estudo de algumas características microbiológicas comparando-se 30 isolados de P. brasilíensís. O primeiro grupo "A', foi constituído por 15 cultivos obtidos de pacientes que desenvolveram a forma aguda da doença. O grupo "C" representou os isolados de pacientes com PCM forma crônica. Os fungos, recebidos de várias procedências, eram mantidos em laboratório por períodos variáveis. A fim de recuperar o potencial de virulência, supostamente atenuado durante os subcultivos ín vitro, todos os fungos foram inicialmente reisolados após desenvolvimento de orquite em hamsters. O estudo foi basicamente desenvolvido com a forma leveduriforme do fungo, obtida por cultivos em PYGA, a 35º C. Os parâmetros incluíram: morfologia microscópica (morfometria da célula-mãe e número de brotamentos)- velocidade de transformação in vitro da forma miceliana para a forma leveduriforme; determinação de curvas de crescimento; expressão da glicoproteína de 43KDa (gp43); polimorfismo isoenzimático e determinação do perfil de susceptibilidade, ín vitro, dos isolados frente aos antifúngicos empregados na terapêutica da PCM. Em todos os aspectos analisados ficou evidente a expressiva variabilidade biológica entre os isolados. Foi possível padronizar o teste de susceptibilidade aos antifúngicos através de adaptações à técnica de referência proposta pelo NCCLS, (l997). Os resultados mostraram-se seguros e reprodutíveis desde que se utilizem cultivos com alto grau de viabilidade celular. Foram testadas anfotericina B, 5-fluorocitosina e os azólicos ítraconazol, cetoconazol e fluconazol. Frente à 5-fiuorocitosina, todos os isolados foram resistentes a concentraçäo iguais ou superiores a 64mg/mL da droga. Em relação aos demais antifúngicos, houve variabilidade nos títulos das ClMs não se caracterizando, porém, nenhum caso de resistência microbiana in vitro. As curvas de crescimento, determinadas através de ...(au)

Determinação da viabilidade do Paracoccidioides loboi em biopsias de pacientes portadores de doença de Jorge Lobo / Determination of the viability of the Paracoccidioides loboi in biopsias of carrying patients of illness of Jorge Wolf

Fundamentos- Na doença de Jorge Lobo, devido ao não cultivo do P.loboi, utiliza-se material obtido de biopsias de pacientes, sendo a determinação da viabiliadade imprescindivel para os estudo experimentais da doença. Objetivos- Determinar a viabilidade do P. loboi, por meio de diferentes metodos de coloração, e investigar a influencia da temperatura e de diferentes soluções na viabilidade do fungo. Casuistica e Metodos- Biopsias de 15 pacientes foram processadas em solução salina 0,85%(SS), solução salina de Hank´s(SSH) e solução salina glicerinada a 30% com vitamina B(SSG). A viabilidade foi determinada no momento da coleta da biopsia (tempo 0), empregando-se os corantes diacetato de fluoresceina-brometo de etideo (DF-BE), lactofenol azul-algodão, azul-tripan e verde-janus. As suspensões foram mantidas a 4°C, 23°C e 37°C, e a viabilidade foi determinada a cada tres dias, utilizando-se a coloração DF-BE. Resultados - A viabilidade do P. loboi no tempo 0 variou de 21 a 46%, utilizando-se a coloração de DF-BE. A viabilidade com os demais corantes não foi satisfatoria, devido a dificuldades em separar os fungos viaveis dos não viaveis. A temperatura de 4°C foi mais eficaz em manter a viabilidade do fungo (ate 15 dias). Por outro lado, nenhuma das soluções empregadas conseguiu manter a viabilidade do fungo ou favorecer sua multiplicação. Conclusões - A determinação da viabilidade do P. loboi com DFG-BE podera auxiliar nas tentativas de cultura do fungo, nas inoculações em animais e no controle terapeutico da doença. Alem disso, a temperatura parece ser fator importante no crescimento do P. loboi.

Chlamydospore formation by Paracoccidioides brasiliensis mycelial form

O papel do conteúdo nutritivo do meio de cultura e de oxigênio na produçäo de clamidósporos pela fase micelial do Pracoccidioides brasiliensis foi investigado. Quatro cepas do fungo (18, Bt4, 1183, Pb9) foram cultivadas, a 25-C, em meio sólido rico e pobre em nutrientes. As cepas 18 e 1183 foram também cultivadas em anerobiose em atmosfera de nitrogênio. A cepa 18 produziu grande número de clamidósporos terminais e intercalares após 7-10 dias de cultura em meio sólido pobre em nutrientes (agar 2%, com dextrose e polipeptona 0,1%). As outras três cepas produziram número significativamente menor de esporos. A cepa 18 näo produziu clamidósporos quando cultivada em dois meios ricos em nutrientes (infusäo de cérebro e coraçäo, e agar destrose de batata). A incubaçäo anaeróbica da cepa 18 em atmosfera de nitrogênio apresentou pequeno crescimento micelial com a presença de numerosos clamidósporos. A nivel ultraestrutural, os clamidósporos apresentam um ou mais núcleos e numerosas mitocôndrias, indicativos de potencial para posterior desenvolvimento. Assim, os esporos produziram gemulaçäo múltipla 1 dia após incubaçäo a 35-C. Os resultados demonstraram que, sob condiçöes ambientais adversas, a fase micelial do P. brasiliensis produz clamidósporos em curto período de tempo. É possível que o fungo encontre condiçöes semelhantes no solo, produzindo os esporos, que poderiam desempenhar papel na propagaçäo da paracoccidioidomicose

Relaçäo parasito-hospedeiro na paracoccidioidomicose: revisäo da literatura / Parasite-host relation in paracoccidioidomycosis: review of the literature

Realizou-se revisäo da literatura dos estudos sobre a relaçäo parasitahospedeiro na paracoccidioidomicose, visando correlacionar estes dados com a patogenia da doença. Inicialmente, foram revistas mecanismos de resistência do hospedeiro ao nível da porta de entrada; açäo dos estrógenos, interagindo com receptores do fungo, bloqueando a transformaçäo dos micélios as formas leveduriformes parasitárias; papel dos fagócitos e do complemento; açäo das células citotóxicas naturais. A seguir, discutiram-se os dados experimentais e humanos indicativos do papel do controle genético sobre resistência e suscetibilidade ao P. brasiliensis. Por fim, foi apresentado o papel da imunidade humoral e celular anti-P, brasiliensis nas defesas do hospedeiro, visando bloquear a divisäo e a disseminaçäo do fungo, e sua interrelaçäo com a morfogênese do granuloma

Liquid nitrogen cryopreservation of Bracoccidioides brasiliensis in Fava's Netto medium

Foi demonstrada a viabilidade do uso do meio de Fava Netto na técnica de criopreservaçäo de células de Pb em nitrogênio líquido